次世代定序(Next Generation Sequencing | 化學工廠資訊網
2011年7月2日—次世代定序(NextGenerationSequencing,NGS)...NGS是目前最新且高通量的定序方法,所謂的NGS是指傳統定序法的改良版,而傳統定序法可以分成兩種來說明 ...
NGS是目前最新且高通量的定序方法,所謂的NGS是指傳統定序法的改良版,而傳統定序法可以分成兩種來說明之。
第一種:Chemical Sequencing
第二種:Sanger Sequencing
我們就拿Sanger Sequencing來解釋何謂傳統定序法?
Sanger於1977年研究出鏈終止定序法(chain termintin),這是當時簡單又方便的定序法,同時也是奠定了現今NGS的基礎。此方法為:
(1)利用DNA當模板,分別將DNA分成4組同時加入DNA polymerase以及dNTP合成。
(2)分加入雙去氧核苷酸(ddATP、ddGTP、ddTTP、ddNTP)反應,雙去氧核苷酸
將會移除烴基,而於合成過程中隨機終止聚合反應,造成不同大小的DNA片
段。
(3)透過電泳分析讀出待測物DNA序列。
由於有以上的定序基礎,在80年代後出現了自動定序儀器。
...
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