簡介次世代定序- | 化學工廠資訊網
2017年5月11日—次世代定序NextGenerationSequencing(NGS)主要以massivelyparallelsequencing的概念建構的高通量技術,達到同時高速大量的核酸定序。
次世代定序Next Generation Sequencing (NGS)主要以massively parallel sequencing的概念建構的高通量技術,達到同時高速大量的核酸定序。與傳統統Sanger定序相比,NGS幾乎快了約6萬倍的速度,因此若以NGS執行人類基因體計畫,將可把時間從10年縮短至1天[1]。
目前NGS可應用於[2]:
DNA level: • Whole genome Sequencing • Genome de novo • Exome & Target region • ChIP sequencing
RNA level: • Transcriptome • miRNA expression
Special Project: • Epigenetics (methylation) • Metagenomics (菌相分析)
目前市面上主要有三種平台:Illumina的Solexa、ABI的SOLiD與Roche的454,然而這三種定序儀的原理都不盡相同,但都是以鏈終止定序法(chain termintin)來進行DNA定序,不需要經過細菌質體複製而減少錯誤的發生[3]。
以Illumina系統為例,其原理主要包含[4]:
1. 利用超聲波將DNA打斷成200-500 bp的片段大小,然後於片段兩端接上接頭(adapter)
2. 將已接接頭的DNA片段放入到表面帶有互補接頭序列的flowcell,接頭互相配對後讓DNA片段吸附於flowcell上
3. 透過橋式聚合酶連鎖反應進行DNA複製,放大訊號
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